1 范圍

      本文件確立了畜禽飼料安全性評價中的肉雞飼養(yǎng)試驗程序，規(guī)定了試驗方案設(shè)計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析、試驗報告和資料存檔等階段的操作指引。

      本文件適用于飼料原料、飼料添加劑安全性評價的肉雞飼養(yǎng)試驗。

2 規(guī)范性引用文件

      下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

      GB 13078 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

      NY/T 33 雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)

      NY/T 388 畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

      NY/T 823 家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量計算方法

3 術(shù)語和定義

      本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4 試驗程序的構(gòu)成

      肉雞飼養(yǎng)試驗程序包括6個階段，分別為試驗方案設(shè)計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析和試驗報告。

5 試驗程序

5.1 試驗方案設(shè)計

5.1.1 試驗方案組成

      飼養(yǎng)試驗開始前，根據(jù)受試物特性及有效劑量進(jìn)行試驗方案設(shè)計；試驗方案包括試驗動物及免疫方案、試驗分組及重復(fù)數(shù)、處理設(shè)置、飼糧配方、試驗期、觀察與檢測和方案確認(rèn)。

5.1.2 試驗動物及免疫方案

5.1.2.1 確定試驗動物的信息，包括品種、日齡、性別、生產(chǎn)階段和健康狀況、動物來源和種群規(guī)模；選擇來自于同品種（系）、同日齡、同批次、性別比例相同、體重相近的健康肉雞。

5.1.2.2 根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵螅贫ㄔ囼瀯游锩庖叻桨浮?/p>

5.1.3 試驗分組及重復(fù)數(shù)

      遵循隨機、重復(fù)和局部控制的原則對試驗動物進(jìn)行分組。各試驗組和對照組的試驗重復(fù)數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析的要求。每組重復(fù)數(shù)不可少于6個，每個重復(fù)的動物數(shù)不能少于10只。性別比例應(yīng)相同。

5.1.4 處理設(shè)置

5.1.4.1 試驗分組

      試驗至少應(yīng)包括三個組，即對照組、有效劑量組和多倍劑量組。

5.1.4.2 試驗劑量

      試驗劑量按以下原則確定：

      a) 有效劑量組應(yīng)該選用最高限量。如果沒有最高限量，應(yīng)選用最高推薦劑量。如果沒有最高推薦量，應(yīng)根據(jù)受試物的自身特性，選擇最低推薦劑量的2倍～5倍作為有效劑量；

      b）多倍劑量組宜選用上述有效劑量的10倍；

      c) 如果受試物的耐受劑量低于有效劑量的10倍，安全性評價試驗應(yīng)能通過尸檢、組織病理學(xué)以及其他適宜的試驗方法提出反映受試物毒性的特異性指標(biāo)，并計算出受試物的安全系數(shù)。

5.1.5 飼糧配方

      按照NY/T 33或相應(yīng)肉雞品種（系）飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)確定飼糧配方。對照組飼糧中通常不應(yīng)含有受試物，但對于某些動物機體的必需營養(yǎng)素（如氨基酸、維生素、微量元素等），對照飼糧中該營養(yǎng)素水平應(yīng)低于動物需要量，但不應(yīng)引起嚴(yán)重缺乏。

5.1.6 試驗期

      肉雞起始試驗日齡應(yīng)為1日齡，最短試驗期為35d。

5.1.7 觀察與檢測

5.1.7.1 臨床觀察

      試驗期內(nèi)應(yīng)每天觀察肉雞臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況、生長情況，并詳細(xì)觀察和記錄不良反應(yīng)。對試驗中出現(xiàn)的不明原因的死亡動物應(yīng)進(jìn)行及時尸檢，宜進(jìn)行組織學(xué)分析。

5.1.7.2 生長性能測定

      平均日采食量、平均日增重、飼料轉(zhuǎn)化率及存活率的測定和計算應(yīng)按照NY/T 823相關(guān)規(guī)定執(zhí)行，并符合以下要求：

      a）平均日采食量：以重復(fù)為單位，準(zhǔn)確稱量試驗各生長階段日糧供給量和試驗結(jié)束時剩料量，計算各重復(fù)在試驗期內(nèi)的飼料采食量和平均日采食量；

      b) 平均日增重：以重復(fù)為單位，在試驗開始和試驗結(jié)束時，分別對試驗動物進(jìn)行活體稱重，稱重前禁食12h；根據(jù)稱重結(jié)果計算各重復(fù)體增重及平均日增重；

      c) 飼料轉(zhuǎn)化率：以重復(fù)為單位，計算試驗期內(nèi)各重復(fù)飼料采食量與體增重的比值；

      d) 育雛期存活率：以重復(fù)為單位，計算存活率。

5.1.7.3 血液學(xué)和臨床生理生化指標(biāo)檢測

      試驗開始和試驗結(jié)束（必要時增加試驗中期）時，每個處理組每個重復(fù)至少隨機抽取一只體重接近平均體重的雞，性別比例相同，分別采集血樣進(jìn)行血液常規(guī)、生化指標(biāo)及其他與受試物相關(guān)的各種生理參數(shù)的檢測。

      血液常規(guī)指標(biāo)主要包括白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計數(shù)（PLT）等指標(biāo)；生化指標(biāo)主要指谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標(biāo)。

5.1.7.4 組織病理學(xué)檢查

      應(yīng)符合以下要求：

      a）尸體解剖學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，每個處理組每個重復(fù)至少隨機抽取一只體重接近平均體重的雞，性別比例一致，進(jìn)行系統(tǒng)尸體解剖學(xué)檢查，為進(jìn)一步的組織學(xué)檢查提供依據(jù)；

      b) 臟器系數(shù)（指數(shù)）測定：試驗結(jié)束時，每個處理組每個重復(fù)至少隨機抽取一只體重接近平均體重的雞，性別比例一致，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，并計算各器官與體重的比值；

      c) 組織病理學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，對多倍劑量組及尸檢異常動物的主要器官進(jìn)行系統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查，詳細(xì)檢查的器官和組織包括：心、肝、脾、肺、腎、胸腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、直腸、骨髓等組織；

      d) 其他特異性觀測指標(biāo)：根據(jù)受試物的作用特點和用途，增加相應(yīng)的特異性觀測指標(biāo)和敏感性功能指標(biāo)。

5.1.8 方案確認(rèn)

      試驗設(shè)計完成后，形成書面試驗方案，且應(yīng)經(jīng)試驗負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。

5.2 飼糧配制

5.2.1 選擇符合要求的飼料原料和飼料添加劑，飼料原料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB13078規(guī)定。按照試驗方案確定的配方和工藝，進(jìn)行飼糧配制。飼糧在配制、貯運過程中避免受到污染。

5.2.2 根據(jù)受試物特性及使用方法確定飼糧加工方法、飼糧類型、粒度等。各處理間試驗因子以外的其他因素，如：料型、粒度、加工方法等，應(yīng)保持一致。

5.2.3 應(yīng)對飼糧營養(yǎng)成分含量進(jìn)行實測，證實所配制的飼糧滿足配方設(shè)計的要求。

5.3 試驗實施

5.3.1 肉雞飼養(yǎng)

5.3.1.1 肉雞飼養(yǎng)開始前，檢查、安裝和調(diào)試飼養(yǎng)設(shè)施及設(shè)備，確保設(shè)施及設(shè)備性能完好。使用前1周對飼養(yǎng)設(shè)備設(shè)施及圈舍進(jìn)行清理、消毒。

5.3.1.2 按照NY/T 388和/或相應(yīng)品種飼養(yǎng)管理手冊設(shè)置雞舍溫度、濕度、風(fēng)速、照度等環(huán)境參數(shù)；如試驗?zāi)康挠刑厥庖?，按需求設(shè)定。當(dāng)環(huán)境參數(shù)出現(xiàn)空間分布不均勻時，根據(jù)差異進(jìn)行隨機區(qū)組安排。

5.3.1.3 根據(jù)試驗?zāi)康倪x擇適宜的飼養(yǎng)方式，并根據(jù)肉雞品種、氣候溫濕度、雞舍通風(fēng)和降溫條件等確定適宜的飼養(yǎng)密度。

5.3.1.4 按照試驗方案確定的肉雞品種和數(shù)量引進(jìn)試驗動物，試驗開始時，組間初始體重相近、性別比例相同。

5.3.1.5 按試驗方案對試驗動物進(jìn)行免疫，免疫措施應(yīng)不干擾受試物的作用模式。

5.3.1.6 不同處理間試驗雞的飼養(yǎng)方式、飼養(yǎng)管理、免疫程序保持一致。

5.3.1.7 飼養(yǎng)試驗用雞實行全進(jìn)全出管理，試驗結(jié)束后對雞舍實施徹底清洗、消毒。

5.3.2 臨床觀察

      試驗期內(nèi)每天觀察試驗動物臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況，記錄病死動物等不良反應(yīng)情況。

5.3.3 指標(biāo)檢測

5.3.3.1 生產(chǎn)性能測定按照5.1.7.2進(jìn)行。

5.3.3.2 血液學(xué)指標(biāo)檢測按照5.1.7.3進(jìn)行。

5.3.3.3 組織病理學(xué)檢查按照5.1.7.4進(jìn)行。

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